路易斯返回巴黎，还有一件令他伤心欲绝的事情等着他。两年前出生的最小的女儿卡米耶患了重病。路易斯虽然不分昼夜地小心看护，可还是没有办法挽救她的生命，终于在1865年9月，两岁的卡米耶去世了。

3个月前敬爱的父亲去世，现在又失去了可爱的幼女。

可是路易斯的不幸，不是仅此而已。第三个噩耗又将接踵而至。那是第二年即1866年的事。

为了小黑斑病的研究，路易斯带了两位助手，他们2月初前往阿拉斯。

路易斯的妻子玛丽在一个月之后，和两个女儿一起，离开巴黎前往阿拉斯。没想到，旅途中在尚贝里市，女儿塞西尔得了伤寒病。路易斯的妻子玛丽决定暂时停留在尚贝里市，先替塞西尔治病，并写信给在阿拉斯的丈夫，通知女儿生病了，她不想耽误丈夫的重要研究，所以并没打算让丈夫来看她们。

接到信的路易斯吓了一跳，很担忧女儿的安危。虽然每天都有通信，但是女儿的病况究竟如何，他放心不下。路易斯害怕塞西尔的情况会很糟糕，会像卡米耶一样无救。他又开始坐立不安，很想赶到尚贝里去看个究竟，但是又怎么能放下这么重要的研究呢？一边是工作的义务，另一边是对女儿的关怀，这让路易斯苦恼不已。助手们看着不忍心，说道：“老师，去尚贝里看看吧。”

路易斯回答说：“我也很想去，但是怕耽误了这一重要的研究。”

助手们继续劝说：“但是如果小姐有什么事就不好了，您得亲自去看看才能安心呀。”

路易斯终于决定将研究搁置两三天。

路易斯匆匆赶到尚贝里，塞西尔看来似乎比料想的要好，见到了父亲喜笑颜开。

路易斯抱着“可怕的病也许不久就会好”的渺茫的希望，在3天之后回到阿拉斯。

可惜的是，女儿塞西尔仍然没能保住生命。到了5月，她的病况急转直下，12岁的塞西尔去世了。

从去年的6月算起，不到一年的时间，路易斯失去了父亲和两个女儿。大女儿也早在7年前就去世了。

路易斯是个很爱家人的人，现在遭受重重的打击，他心头的沉痛与悲哀，不是常人所能想象的。运送塞西尔遗体到阿尔布瓦的路易斯，神情中充满了哀痛。

为了抚慰创伤的心灵，路易斯除了研究以外没有其他办法。他一回到阿拉斯，就马上恢复研究工作，他对研究的热忱，越来越旺盛了。

实验计划堆积如山，实验以外，还有很多其他的工作。比如说，发表过的有关小黑斑病的许多论文当中，只要是认为稍有价值的就必须要看。除此之外，许多人的来信，也得一一回复。虽然事情很多，但路易斯却有条不紊一个个地予以处理。

很多实验的结果都明显表示，小黑斑病会传染也会遗传。

将含有小黑斑菌的溶液涂在桑叶上，然后拿去喂蚕，就会使它患上小黑斑病。这就充分证明了小黑斑病会传染。

检查去年健康组卵孵化成的蚕和疾病组卵孵化成的蚕，结果正如所料，此病会遗传。

通过实验结果，路易斯做了结论：要防止小黑斑引起的疾病的发生，应该收集未患小黑斑病的蛾所生的卵，放在不会接触到小黑斑的地方饲养。

不过，这还不是最后的结论。要找出具体的预防方法为时过早。路易斯所做过的实验还不够充分，也还没能得到决定性的证据。

“这回要准备更多的蚕卵，以便能够支持我明年做的决定性的实验。”路易斯安静地想着。他在写给好友夏布伊的信里也说：“为了确实证明已完成的研究结果，还得再等待一年。没有比这种研究更烦人的事情了！”一年之中，只有短短的养蚕期才能从事研究工作，这让路易斯感觉很不耐烦。